Не четете това, ако сте ваксиниран

21.06.2022 / От редактори на новини / 

mRNA Covid ваксините не предлагат по същество никаква защита срещу Omicron само месеци след бустерна инжекция, според голямо ново проучване от британски изследователи.

(Статия от Алекс Беренсън, препубликувана от AlexBerenson.Substack.com )

Както антителата, така и Т-клетъчната защита почти не съществуват, установиха учените.

В още по-тревожно развитие, когато ваксинираните, но неинфектирани преди това хора страдат от пробивни инфекции с Omicron, техният Т-клетъчен отговор е предубеден към по-ранните версии на Sars-Cov-2 -  не към варианта на Omicron, който действително ги е заразил.

С други думи, иРНК изглежда трайно погрешно засяга имунната система на хората, които получават, и ги насочват към производството на Т-клетки, за да атакуват варианти, които вече не съществуват – въпреки че изобщо никога не са били заразени с тези варианти.

Проблемите с Т-клетките са особено изненадващи и тревожни.

Докато антителата са първата линия на защита срещу инфекция и се опитват да изчистят вируса от кръвния поток, Т-клетките са решаващата втора линия. Те атакуват и унищожават заразените клетки и също така работят с други части на имунната система, за да произвеждат повече и по-добре насочени антитела по-късно.

Защитниците на ваксините безкрайно твърдят, че генерираните от иРНК Т-клетки помагат да се предпазят хората от тежко заболяване от Covid, дори след като изчезнат антителата на първа линия срещу инфекция.

Това проучване предполага, че предполагаемата защита може да е мит, а ниските нива на смъртност от Omicron са просто резултат от общата липса на вирулентност на Omicron както при ваксинирани, така и при неваксинирани хора.

 

—

Проучването също така предоставя допълнителни доказателства, че начинът, по който тРНК действат, може да направи ваксинираните хора още по-уязвими към инфекция и повторно заразяване с течение на времето.

Ударите карат хората да произвеждат един вид антитела срещу коронавирус. Но проучването предполага, че способността на имунната система да победи вируса зависи и от други антитела - и инжекциите възпрепятстват производството на тези.

Учените изпитват ненавист да признават, а още по-малко да обсъждат, потенциалните дългосрочни проблеми, които може да причини потискането на тРНК ваксината на широкото производство на антитела.

В този случай обаче авторите бяха достатъчно загрижени, за да признаят проблема. Те написаха, че общият имунитет може да се възползва от части от коронавируса, които са „изложени само по време на инфекция“. Въпреки това те заровиха това предупреждение на високотехнически език дълбоко във вестника, знак за политическата чувствителност, която заобикаля всяка критика към ваксините.

ИЗТОЧНИК

—

Престижното списание Science публикува статията, която се основава на анализ на антитела и В- и Т-клетки в група британски здравни работници, които изследователите следват от март 2020 г.

Изследователите бяха фокусирани основно върху потенциала на Omicron да причинява реинфекции при ваксинирани хора, които вече са били заразени с по-ранни варианти на Covid. Но те също така проучиха потенциала му да причини инфекции за първи път при неинфектирани преди това, но ваксинирани хора. Това са констатациите, които са най-интересни за всеки, който се интересува от неуспех на ваксината.

За съжаление, но не е изненадващо, учените не са разгледали имунните реакции на  всеки  , който не е бил ваксиниран - със или без предишна инфекция. По този начин документът не предлага директно сравнение на начина, по който Omicron може да повлияе на антителата и В- и Т-клетъчните отговори при ваксинирани и неваксинирани хора.

Защо изследователите не са включили неваксинирани хора? Може би защото почти всички възрастни британци са ваксинирани и най-добре подсилени, така че авторите искаха да се съсредоточат върху рисковете, които Omicron представлява за ваксинираните хора.

Или може би защото се притесняваха какво ще намерят, ако директно сравняват двете групи.

—

Независимо от това, документът показва ясно, че ваксинациите и бустерните дози предлагат най-много няколко седмици защита срещу Omicron.

Нито един от „тройно ваксинираните, наивни към инфекция“ хора, изследвани от изследователите, не е имал антитела, способни да неутрализират Omicron в рамките на 14 седмици след третата доза. И изследователите откриват Т-клетъчен отговор към Omicron само при 1 от 10 души, които са били трикратно ваксинирани, но не са заразени преди това.

В допълнение, изследователите установиха, че група от преди това неинфектирани, но ваксинирани хора, които след това са се заразили с Omicron, имат много по-силен отговор на Т-клетките към по-ранни варианти.

—

Както е типично за документите, които представят тези открития, изследователите не са направили изрично най-тревожните заключения, които техните данни предполагат.

Но те открито предполагат факта, че имунният отговор при ваксинираните хора е предубеден към по-ранни варианти на коронавирус, а не Omicron  , дори при хора, които не са били заразени с тези по-ранни варианти,  може да помогне да се обяснят „честите реинфекции на B.1.1.529 (Omicron) с Кратките интервали от време между инфекциите доказват нова характеристика в тази вълна."

По-малко ясно е какво, ако изобщо има нещо, всеки може да направи за това отпечатване. Авторите отбелязват, че усилията на производителите на ваксини да произвеждат по-нови снимки на иРНК, които карат тялото да произвежда пика на Omicron, до голяма степен не са успели да преодолеят проблема, вероятно поради същата причина – първоначалното отпечатване е твърде силно.

Междувременно обаче Omicron остава сравнително мек. Докато тя не мутира, за да стане по-опасна, защитниците на ваксините могат да продължат да се преструват, че клиничното изпитване с милиард души от 2021 г. не завършва катастрофално.

Прочетете повече на:  AlexBerenson.Substack.com

Повишаването на имунитета чрез B.1.1.529 ( Omicron) зависи от предишно излагане на SARS-CoV-2 КАТРИН ДЖ. РЕЙНОЛДС HTTPS://ORCID.ORG/0000-0002-1371-653XКОРИНА ПАДЕ HTTPS://ORCID.ORG/0000-0003-0626-2346ДЖОУЗЕФ М. ГИБЪНС HTTPS://ORCID.ORG/0000-0002-7238-2381АШЛИ Д. ВИДРА HTTPS://ORCID.ORG/0000-0002-8317-9194КАЙ-МИН ЛИН HTTPS://ORCID.ORG/0000-0003-2109-1530ДАЯНА МУНЬОС САНДОВАЛ HTTPS://ORCID.ORG/0000-0001-8350-3989ФРАНЦИСКА П. ПАЙПЪР HTTPS://ORCID.ORG/0000-0002-4857-0518ДЕЙВИД К. БЪТЛЪР HTTPS://ORCID.ORG/0000-0003-1882-8159СИЙ ЛИУ HTTPS://ORCID.ORG/0000-0003-0206-9661[...]РОЗМАРИ ДЖ. БОЙТЪН HTTPS://ORCID.ORG/0000-0002-5608-0797 +12 автори Информация За Авторите И Връзки НАУКА 14 юни 2022 г Първо издание DOI: 10.1126/science.abq1841   206 161 Метрика Общо Изтегляния206 161

• Последните 6 месеца206 161
• Последните 12 месеца206 161

абстрактн

• Дискусия
• Материали и методи
• Признания
• Допълнителни материали
• Препратки и бележки
• електронни писма (0)

абстрактно Омикрон или Pango линия B.1.1.529, вариант на SARS-CoV-2 носи множество шипови мутации с висока степен на предаване и частично неутрализиращо антитяло (nAb) избяга. Ваксинираните индивиди показват защита от тежко заболяване, което често се приписва на подготвен клетъчен имунитет. Изследвахме Т и В клетъчния имунитет срещу B.1.1.529 при ваксинирани с тройна тРНК здравни работници (HCW) с различни истории на инфекция със SARS-CoV-2. Имунитетът на В и Т клетките срещу предишни варианти, предизвикващи безпокойство, е повишен при тройно ваксинирани индивиди, но степента на Т и В клетъчните отговори срещу B.1.1.529 spike протеин е намалена. Имунното отпечатване чрез инфекция с по-ранния вариант B.1.1.7 (Alpha) доведе до по-малко трайно свързващо антитяло срещу B.1.1.529. Предишно не е заразен HCW, който се е заразил по време на B.1.1. 529 вълна показва засилен имунитет срещу по-ранни варианти, но намалява потентността на nAb и Т-клетъчните отговори срещу самия B.1.1.529. Предишна инфекция с Wuhan Hu-1 отмени разпознаването на Т-клетките и всеки засилен кръстосано-реактивен неутрализиращ имунитет при инфекция с B.1.1.529.   В края на 2021 г. опасният вариант на SARS-CoV-2 Omicron (VOC) се разпространи бързо, измествайки предишния най-разпространен ЛОС, B.1.617.2 (Delta) ( 1 , 2 ). B.1.1.529 (Omicron) се отклонява повече от наследствената последователност на Wuhan Hu-1, отколкото други ЛОС досега, с 36 кодиращи мутации в пика, свързани с високо предаване, склонност към инфектиране на клетките на горния бронх и представяне с грипоподобно симптоми ( 3 – 5 ). В няколко проучвания ваксинацията с 2 или 3 дози предпазва от тежко заболяване и хоспитализация, макар и с лоша защита срещу предаване ( 6 – 8). Обосновката за този висок процент на пробивни инфекции идва от картографирането на неутрализацията на вируса с помощта на имунни серуми след ваксинация или моноклонални антитела, което показва, че това е най-избежният от антитела ЛОС, с титри обикновено намалени с 20-40 пъти ( 9 – 12 ). Относителното отслабване на тежките симптоми при ваксинираните в сравнение с неваксинираните групи вероятно се дължи на частичната защита, предоставена от репертоара на остатъчния неутрализиращ Ab (nAb) и активирането на подготвена В-клетъчна и Т-клетъчна памет ( 13-18 ) . В настоящото проучване приложихме нашия текущ анализ на група лондонски здравни работници (HCW) ( 19 – 24) за справяне с два, ключови въпроса за имунитета на B.1.1.529 (Omicron). Първо, след по-ранната демонстрация, че хората на този етап от пандемията носят хетерогенни, имунно-отпечатани репертоари, извлечени от техните отличителни истории на инфекция и ваксинация, ние проучихме как тези разлики се проявяват в диференциално, кръстосано разпознаване на B.1.1.529 ( Omicron) спрямо други ЛОС, на ниво на свързване и неутрализиране на Ab, B-клетъчен и Т-клетъчен имунитет ( 24). Анализирайки лондонска кохорта HCW, имаща подробна надлъжна, клинична, транскриптомна и имунологична характеристика, ние разгледахме степента, до която предишната среща с антиген на пик чрез инфекция и ваксинация оформя последващ имунитет към B.1.1.529 (Omicron) чрез имунен импринт. Второ, когато инфекциите и реинфекциите на B.1.1.529 (Omicron) са толкова широко разпространени ( 25 ), възможно е инфекцията с B.1.1.529 (Omicron) да придаде доброкачествен, жив бустер на имунитета на ваксината. Следователно, ние изследвахме степента, до която инфекцията с B.1.1.529 (Omicron) повишава кръстосано реактивния В и Т клетъчен имунитет срещу други ЛОС и себе си. Резултати В-клетъчен имунитет след три дози ваксина Лондонска кохорта от HCW беше проследена надлъжно от март 2020 г. до януари 2022 г. HCW бяха идентифицирани с лека и асимптоматична SARS-CoV-2 инфекция от предшественик Wuhan Hu-1, B.1.1.7 (Alpha VOC), B.1.617.2 (Delta VOC) и след това B.1.1.529 (Omicron VOC) по време на последователни вълни на инфекция и след първа, втора и трета иРНК (BioNTech BNT162b2) дози ваксина ( фиг. 1A , фиг. S1 и таблица S1). Идентифицирахме лица с различни комбинации от инфекция със SARS-CoV-2 и история на ваксинация, за да проучим въздействието на имунния импринт. Серологията на N и S1 рецептор свързващ домен (RBD) беше наблюдавана надлъжно ( Фиг. 1В). Както беше съобщено по-рано, третата пикова експозиция повиши по-голямата част от HCW над титър на S1 RBD от 1/10 000 свързващо антитяло U/ml на 2-3 седмици след най-новата доза ваксина. При три дози ваксина отговорите на антителата са се повишили, независимо от историята на инфекцията ( 24 ). Фиг. 1 . Историята на инфекция със SARS-CoV-2 променя Ab и B клетъчния имунитет при тройно ваксинираните здравни работници. ( A ) Графично обобщение, изобразяващо инфекцията със SARS-CoV-2 и историята на ваксинацията на изследваните здравни работници. ( B ) Серумно Ab свързване срещу SARS-CoV-2 N (горен панел) и предков Wuhan Hu-1 S1 RBD (долен панел) при неинфекциозен HCW (синьо, n = 11-245) и HCW с лабораторно потвърден SARS- Инфекция с CoV-2 по време на вълните Wuhan Hu-1 (червени, n = 20-71) или B.1.1.7 (алфа, зелени, n = 12-42). Данните са показани преди ваксинацията и в определени времеви точки след първа, втора и трета доза BNT162b2. ( C ) Серум S1 RBD Ab свързване и ( D) nAb IC50 срещу предков Ухан Hu-1, B.1.1.7 (Alpha), B.1.351 (Beta), P.1 (Gamma), B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) жив вирус 2-3 w след третата доза ваксина при неинфекциозен здравен лекар (синьо, n = 25) или здравен лекар с лабораторно потвърдена инфекция със SARS-CoV-2 по време на предшественика Wuhan Hu-1 (червен, n = 18), B. 1.1.7 (Алфа, зелено, n = 13) или B.1.617.2 (Делта, лилаво, n = 6) вълни. ( E ) Честота на MBC, специфични за предшественика на Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) spike S1 протеин 20-21w след втората и 2-3w след третата доза ваксина в не са заразени (синьо, n = 7-9) или HCW, заразени със SARS-CoV-2 по време на Wuhan Hu-1 (червено, n = 9-10), B.1.1.7 (Алфа, зелено, n = 7 -9) и B.1.617.2 (Делта, лилаво, n = 3-6) вълни. ( Ф) Данните за честотата на MBC, нанесени по двойки за отделни HCW при 20-21 w след втора доза (горен панел) или 2-3 w след трета доза (долен панел). ( Г) Връзки между S1 RBD VOC и свързването на VOC с цял шип (ляв панел) и nAb IC50 (десен панел) срещу B.1.1.7 (Alpha) и B.1.617.2 (Delta) при неинфекциозни ( синьо, n = 25) HCW и HCW, заразени по време на наследствения Wuhan Hu-1 (червено, n = 18), B.1.1.7 (Алфа, зелено, n = 13) и B.1.617.2 (Делта, лилаво, n = 6) вълни. Статистическите тестове бяха извършени с помощта на Prism 9.0. [(B) до (E)] Mann-Whitney U тест, (F) Wilcoxon съвпадащи двойки подписан ранг тест, (G) Ранг корелация на Spearman. Ab, антитяло; ASC, антитяло секретиращи клетки; AU, произволни единици; COI, пределен индекс; f/u; проследяване; здравни работници, здравни работници; N, нуклеокапсид; RBD, рецептор свързващ домен; S1, субединица 1; MBC, памет B клетка; VOC, вариант на загриженост; w, седмици. ОТВОРЕТЕ В ПРОГЛЕД При тройно ваксиниран HCW 2-3 седмици след третата им доза (таблица S1), ние сравнихме титрите на антитела срещу RBD ( фиг. 1C ), цял шип (фиг. S2) и жив вирус nAb IC50 ( фиг. 1D ) за предков Ухан Hu-1 и всеки от ЛОС (таблица S2). Стратифицирахме ваксинираните здравни работници според това дали те не са били заразени или са имали преди това инфекция с Wuhan Hu-1, B.1.1.7 (Alpha) или B.1.617.2 (Delta) ( Фиг. 1A ). Открихме разлики в имунното отпечатване, което показва, че тези, които са били заразени по време на вълната на предците Ухан Hu-1, са показали значително намален титър на анти-RBD срещу B.1.351 (Beta), P.1 (Gamma) и B.1.1.529 (Omicron ) в сравнение с неинфекциозни здравни работници ( фиг. 1C). Хибридните имунни групи, които са преживели предишна инфекция с Wuhan Hu-1 и B.1.1.7 (Alpha), показват по-мощни nAb отговори срещу Wuhan Hu-1, B.1.1.7 (Alpha) и B.1.617.2 (Delta) ( Фиг. 1D ). Въпреки това, кръстосано реактивното S1 RBD IgG антитяло и nAb IC50 срещу B.1.1.529 (Omicron) бяха значително намалени в сравнение с други ЛОС, независимо от предишната история на инфекция със SARS-CoV-2 (таблица S3 и фиг. 1, C и D ). Честотата на В-клетките на паметта (MBC) срещу предшественика Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) S1 протеинът беше повишен 2-3 седмици след третата доза ваксина в сравнение с 20-21 седмици след втората доза ваксина ( фиг. 1Е). Независимо от историята на инфекцията, честотата на MBC срещу Wuhan Hu-1 и B.1.617.2 (Delta) S1 е сходна, но значително намалена спрямо B.1.1.529 (Omicron) S1 2-3 седмици след третата доза ваксина [намаляване в B.1.1.529 (Omicron) честотата на S1 MBC в сравнение с Wuhan Hu-1 S1 е била 2 пъти (p = 0,0156) за наивна инфекция, 2,4 пъти за инфекция с Wuhan Hu-1 (p = 0,0020), 1,9- пъти за B.1.1.7 инфекция (p = 0,0312) и 2,9 пъти за B.1.617.2 инфекция (p = 0,0312)] и на 20-21 седмици след втората доза [намаляване на B.1.1.529 (Omicron ) Честотата на MBC в сравнение с Wuhan Hu-1 е била 2,5 пъти (p = 0,0039) за неинфекциозни HCW и 2,2 пъти (p = 0,0039), 2,0 пъти (p = 0,0078) и 2,9 пъти (p = 0,1250) за Wuhan Hu-1, B.1.1.7 и B.1.617.2 инфекциозни групи съответно] ( фиг. 1F и таблица S4) S1 RBD или свързване на антитяло с цели шипове и жив вирус nAb IC50 корелират за B.1.1.7 (алфа) и B.1.617.2 (делта), но не и за B.1.351 (бета), P.1 (гама), B .1.1.529 (Omicron), което показва, че антитяло свързващата серология е лош маркер за nAb IC50 ( фиг. 1G и фиг. S3). Разликите между VOC RBD и свързването на цял шип и nAb IC50 с жив вирус показват, че регионите, насочени към антитела извън RBD/шип или конформационни епитопи, изложени само по време на инфекция, могат да допринесат за неутрализация ( 26 , 27 ) ( Фиг. 1, C и D ). Т-клетъчен имунитет след три дози ваксина След това сравнихме Т-клетъчните отговори при тройно ваксиниран HCW 2-3 седмици след третата доза, които или не са били заразени, или са били заразени по време на Wuhan Hu-1, B.1.1.7 (Alpha) или B.1.617. 2 (Делта) вълни (фиг. S1 и таблица S1). Сравнихме Т-клетъчния имунитет срещу картографиран епитопен пул (MEP) от предшественици на Wuhan Hu-1 шипови пептиди (таблица S5A) с spike S1 протеин от предшественик Wuhan Hu-1 или S1 протеини, съдържащи B.1.617.2 (Delta) или B .1.1.529 (Omicron) мутации. Измерването на Т клетъчните отговори срещу естествено обработени епитопи от целия S1 протеинов антиген на предците на Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) или B.1.1.529 (Omicron) ни позволи да се съсредоточим върху имунодоминантните отговори, представителни за тези, представени в инфекция в реалния живот. Т-клетъчните отговори срещу протеина Wuhan Hu-1 S1 отразяват тези, предизвикани от MEP стимулация,Фиг. 2А ). Въпреки това, за протеина S1 B.1.1.529 (Omicron) открихме значително намален размер на отговора. Като цяло повече от половината (27/50; 54%) не са дали Т-клетъчен отговор срещу S1 B.1.1.529 (Omicron) протеин, независимо от предишната история на инфекция със SARS-CoV-2, в сравнение с 8% (4/50) които не предизвикват Т-клетъчен отговор срещу предшественика Wuhan Hu-1 S1 протеин (p 195 (фиг. S4). B.1.1.529 (Omicron) шиповите мутации обхващат печалба и загуба на Т клетъчни епитопи Поради сложността, присъща на картографирането на ефектите от мутациите в отделни Т клетъчни епитопи в кохорти, носещи хетерогенни HLA алели, ние картографирахме диференциалното разпознаване на шиповите мутации B.1.1.529 (Omicron), използвайки HLA-DRB1*04:01 трансгенни мишки ( 23 , 24 ) ( фиг.3 ). Пептидният пул, съдържащ B.1.1.529 (Omicron) специфични S1 и S2 мутации на шипове и неговия предков еквивалентен пул на Wuhan Hu-1 показа диференциално, специфично за последователността Т-клетъчно праймиране или от предков Wuhan Hu-1, или от B.1.1.529 ( Omicron) специфични за последователността пептидни пулове ( Фиг. 3Аи таблица S5B). Тоест, имунизирането на HLAII трансгенни мишки или с наследствена Wuhan Hu-1, или B.1.1.529 (Omicron) специфични пептидни пулове ни позволи да изследваме диференциално, специфично за последователността Т-клетъчно праймиране, което възниква в резултат на B.1.1.529 (Omicron) шипови мутации. Ние показахме, че зареждането с единия пул води до нарушени отговори на другия ( Фиг. 3А ). След това разгледахме отговорите на отделни HLA-DRB1*04:01 епитопи. Интересно е, че докато мутациите B.1.1.529 (Omicron) са свързани в четири случая със загуба на ясен HLA-DR4-ограничен Т клетъчен епитоп ( фиг. 3В: S371L/S373P/S375F, p = 0,0006; N440K/G446S, p = 0,0210; Q493R/G496S/Q498R/N501Y/Y505H, p = 0,0064; N679K/P681H, p = 0,0128), епитопи на мутиралата последователност в четири случая доведоха до de novo усилване на специфични за Omicron, HLA-DR4 Т клетъчни епитопи ( фиг. 3C : A67V/del 69-70, p = 0,0152/; G142D del 143-5, p = 0,0152; Q493R/ G496S/Q498R/N501Y/Y505H; N679K/P681H, p = 0,0281; N764K, p = 0,0281). Мутацията G142D/del 143-5 създава усилване на функционален епитоп, преминавайки от регион, който не се разпознава от Т клетките, към такъв, който индуцира Th1/Th17 ефекторна програма ( Фиг. 3D ). По-рано показахме, че мутацията N501Y превръща Т-клетъчния ефектор-стимулиращ епитоп в индуктор на имунна регулация ( 24). Тази находка беше потвърдена и повторена от по-обширните промени в мутантния епитоп Q493R/G496S/Q498R/N501Y/Y505H ( фиг. 3Е ). Фиг. 3 . B.1.1.529 (Omicron) шипови мутации променят разпознаването на Т клетките. ( A ) HLAII трансгенни мишки, носещи DRB1*0401 в контекста на хомозиготен нокаут за миши H2-Aβ (7-8w), бяха имунизирани или с B.1.1.529 (Omicron, n = 7) VOC пул от 18 пептида, включващи мутациите на последователността на Omicron или наследствения пул от пептиди Wuhan Hu-1 (n = 6) с еквивалентни немутирани последователности. При d10 DLN клетките бяха приготвени от имунизирани мишки и стимулирани или с Wuhan Hu-1 (червен) или B.1.1.529 (Omicron, черен) пептидни пулове и Т клетъчни отговори, измерени чрез IFNy ELISpot. Б _ _ _ _ .1.1.529 (Omicron) пептиден пул (n = 6) имунизирани мишки. ( Ди E ) Топлинни карти, показващи относителна генна експресия на маркери за активиране на Т клетки в DLN клетки, взети от B.1.1.529 (Omicron) G142D/del143-5 пептиден грунд (D) (n = 6) или Wuhan Hu-1 Q493R/G496S/ Q498R/N501Y/Y505H пептиден прайминг (E) (n = 6) HLA-DRB1*04:01 трансгенни мишки. DLN клетките бяха стимулирани за 24 часа in vitro с 10 μg/ml Wuhan Hu-1 или B.1.1.529 (Omicron) вариантен пептид преди РНК екстракция. Гените, показани в топлинната карта, са значително повишени (p 0,539), но имаше значително разминаване в толкова много на HCW, регистриращ неоткриваем жив вирус nAb IC50 срещу B.1.1.529 (Omicron) записа S1 RBD (Omicron) свързваща серология в диапазона от 3412 до 20 484, което показва, че S1 RBD (VOC) антитяло свързваща серология може да бъде подвеждащ маркер и лош маркер nAb ( фиг. 4G и фиг. S6). Т-клетъчен имунитет след B.1.1.529 (Omicron) инфекция След това проучихме Т-клетъчния имунитет след пробивна инфекция по време на вълната B.1.1.529 (Omicron). Четиринадесет седмици след третата доза (9/10, 90%) от тройно ваксиниран, неинфектиран преди това HCW не показа кръстосано реактивен Т-клетъчен имунитет срещу B.1.1.529 (Omicron) S1 протеин ( Фиг. 5А ). Фиг. 5 . Т-клетъчни отговори в тройно ваксинирани HCW, заразени по време на вълната B.1.1.529 (Omicron). ( A ) Т клетъчни отговори срещу предшестващ Wuhan Hu-1 spike MEP пул или Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) VOC S1 протеин за PBMC, взети от неинфекциозен HCW ( синьо, n = 10) или HCW с лабораторно потвърдена инфекция със SARS-CoV-2 по време на Wuhan Hu-1 (червено, n = 3), B.1.1.529 (Omicron, черно, n = 11) или Wuhan Hu-1 последвано от B.1.1.529 (Omicron, розово, n = 6) вълни. PBMC бяха взети 14w (средно 14w, IQR 3w) след третата доза ваксина и Т-клетъчните отговори, оценени чрез IFNy ELISpot. Круговите диаграми показват процента, който е имал откриваем Т-клетъчен отговор срещу всеки антиген. ( B ) Т клетъчни отговори срещу spike MEP пул и S1 VOC протеин за преди инфектиране, тройно ваксиниран HCW, заразен по време на вълната B.1.1.529 (Omicron, черен, n = 11). ( C) Т клетъчни отговори срещу предци Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) S1 протеини, начертани по двойки за неинфекциозни HCW (синьо, n = 10) или HCW с лаборатория потвърдена инфекция със SARS-CoV-2 по време на Wuhan Hu-1 (червен, n = 3), B.1.1.529 (Omicron, черен, n = 11) или Wuhan Hu-1, последван от B.1.1.529 (Omicron, розово, n = 6) вълни. Статистическите тестове бяха извършени с помощта на Prism 9.0. (A) Mann-Whitney U тест, [(B) и (C)] Wilcoxon съвпадащи двойки подписан ранг тест. здравни работници, здравни работници; IQR, междуквартилен диапазон; MEP, картографиран епитопен пептид; PBMC, мононуклеарни клетки на периферната кръв; S1, субединица 1; SFC; петнообразуващи клетки; VOC, вариант на загриженост; w, седмици. ОТВОРЕТЕ В ПРОГЛЕД Т-клетъчният отговор срещу B.1.1.529 (Omicron) S1 протеин след инфекция по време на вълната B.1.1.529 (Omicron) на преди това заразени HCW е значително намален в сравнение с Wuhan Hu-1 S1 и B.1.617.2 (Delta) S1 в тройно ваксиниран HCW [геометрична средна, 57, 50 и 6 SFC за Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) S1 протеини съответно, p = 0,001) ] ( Фиг. 5В). HCW, заразени по време на вълната B.1.1.529 (Omicron), показаха сходни Т клетъчни отговори срещу spike MEP, предшественик Wuhan Hu-1 S1 и B.1.617.2 (Delta) S1 протеини, но значително намалени Т клетъчни отговори срещу B.1.1 .529 (Omicron) S1 протеин [намаляване на средната геометрична стойност на Т клетъчния отговор (SFC) срещу VOC S1 протеин в сравнение с този за Wuhan Hu-1 S1: 1,1-кратно намаление за B.1.617.2 S1, p = 0,6836; 10-кратно намаление за B.1.1.529 S1, p = 0,001] ( фиг. 5В ). По този начин, въпреки че пробивната инфекция при тройно ваксинирани по време на инфекциозната вълна на Omicron засили кръстосано реактивното Т-клетъчно имунно разпознаване срещу пиковия пул MEP (p = 0,0117), предшественият Wuhan Hu-1 (p = 0,0039), B.1.617.2 ( Delta) (p = 0,0003) и B.1.1.529 (Omicron) ( фиг. 5A), Т клетъчният отговор срещу самия протеин B.1.1.529 (Omicron) S1 в сравнение с spike MEP (p = 0,001), Wuhan Hu-1 (p = 0,001) и B.1.617.2 (Delta) (p = 0,001) е значително намален ( фиг. 5, B и C ). Важно е, че нито един (0/6) от HCW с предишна история на инфекция със SARS-CoV-2 по време на вълната Hu-1 в Ухан не отговори на B.1.1.529 (Omicron) S1 протеин ( фиг. 5A ). Това предполага, че в този контекст инфекцията с B.1.1.529 (Omicron) не е в състояние да засили имунитета на Т-клетките срещу самия B.1.1.529 (Omicron); имунното отпечатване от предишна инфекция с Wuhan Hu-1 доведе до липса на Т-клетъчен отговор срещу B.1.1.529 (Omicron) S1 протеин. Тези открития бяха допълнително подчертани в сдвоени данни, показващи спад в Т клетъчния отговор при отделните HCW за трите антигена: на индивидуална основа повечето HCW запазиха Т клетъчното разпознаване на B.1.617.2 S1, но обикновено показваха нарушено разпознаване на Т клетките на B.1.1.529 S1 ( фиг. 5C ). Взети заедно с данните, показани на фиг.4, констатациите показват последователно, че хората, първоначално заразени с Wuhan Hu-1 в първата вълна и след това повторно заразени по време на вълната B.1.1.529 (Omicron), не повишават Т-клетъчния имунитет срещу B.1.1.529 (Omicron) на ниво на разпознаване на nAb и Т клетки. Предишна инфекция по различен начин отпечатва Omicron T и B клетъчния имунитет За да проучим по-подробно въздействието на предишна SARS-CoV-2 инфекция върху имунния импринт, ние допълнително проучихме отговорите в нашата надлъжна кохорта HCW ( фиг. 6A и фиг. S1). Първоначално разгледахме отговорите на свързване на антитела на S1 RBD (предшественият Wuhan Hu-1 и Omicron VOC) в надлъжната кохорта при ключови ваксинации и времеви точки на инфекция със SARS-CoV-2, като изследвахме как различната експозиция отпечатва диференциалния кръстосано-реактивен имунитет и издръжливост. Това разкри, че на 16-18 седмици след инфекция с Ухан Hu-1 или инфекция с B.1.1.7 (Алфа), неваксинираният HCW не показва забележими кръстосано реактивни S1 RBD свързващи антитела срещу B.1.1.529 (Omicron) ( Фиг. 6C ). Фиг. 6 . SARS-CoV-2 инфекцията отпечатва диференциална кръстосана реактивност на Ab към VOC. ( A ) Графично обобщение, изобразяващо инфекцията със SARS-CoV-2 и историята на ваксинацията на изследваните здравни работници. HCW, които не са заразени, са обозначени в синьо. HCW, заразени по време на различните вълни, са обозначени, както следва: предшественик Wuhan Hu-1 (червен), B.1.1.7 (Alpha, зелен) и B.1.617.2 (Delta, лилав), B.1.1.529 (Omicron, черно) и Wuhan Hu-1, последвано от B.1.1.529 (Omicron, розово). ( В и В) Серумно Ab свързване срещу предков Wuhan Hu-1 S1 RBD (B) и B.1.1.529 (Omicron) S1 RBD (C) при неинфекциозно наивно здравно лечение (синьо, n = 11-29) или в здравна помощ с лабораторно потвърден SARS -CoV-2 инфекция по време на наследствения Wuhan Hu-1 (червено, n = 4-27), B.1.1.7 (Алфа, зелено, n = 8-35), B.1.617.2 (Делта, лилаво, n = 6-7), B.1.1.529 (Omicron, черно, n = 11) или Wuhan Hu-1, последвано от B.1.1.529 (Omicron, розово, n = 6) вълни. Данните са показани преди ваксинацията и във времеви точки след първата, втората и третата доза ваксина. ( Д) Кръстосано реактивен nAb IC50 срещу предшественика на Wuhan Hu-1, B.1.1.7 (Alpha), B.1.351 (Beta), P.1 (Gamma), B.1.617.2 (Delta) и B.1.1.529 (Omicron) жив вирус 2-3 w след трета доза ваксина при неинфекциозен HCW (синьо, n = 24) или HCW с лабораторно потвърдена SARS-CoV-2 инфекция по време на Wuhan Hu-1 (червен, n = 18), B .1.1.7 (Алфа, зелено, n = 13) или B.1.617.2 (Делта, лилаво, n = 6) вълни и при 14 w (средна 14 w, IQR 3 w) след трета доза ваксина в здравна помощ с лабораторно потвърден SARS- CoV-2 по време на вълните B.1.1.529 (Omicron, черно, n = 11) или Wuhan Hu-1, последвано от B.1.1.529 (Omicron, розово, n = 6). Данните са нанесени по двойки за отделните здравни работници. ( Е) Понички, показващи относителния дял на HCW с nAb IC50 от 250 U/ml, автоматично се разреждат от анализатора. Рекомбинантни протеини Wuhan Hu-1 SARS-CoV-2 S1 spike протеин (Z03485-1) и B.1.617.2 (Delta) SARS-CoV-2 S1 spike протеин (T19R, G142D, del 156-157, R158G, L425R, T478K , D614G, P681R) (Z03612-1) са закупени от GenScript USA Inc. B.1.1.529 (Omicron) SARS-CoV-2 S1 spike (A67V, H69del, V70del, T95I, G142D, V143del, Y14del, Y14del , L212I, ins214EPE, G339D, S371L, S373P, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, G496S, Q498R, S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, Y543G, S653G, S64G37 S375F, K417N, N440K, G446S, S477N, T478K, E484A, Q493R, G496S, Q498R, N501Y, Y505H) (съответно REC32006 и REC32007 от Native Antigen Company) бяха закупени от Native Antigen Company. Пептиди Спайк картирани епитопи (MEP) съдържа по-рано описан пул от осемнадесет 12-20mer пептидни епитопи ( 20 , 23 , 24 ) (таблица S5A). B.1.1.529 (Omicron) и Wuhan Hu-1 пептидни пулове се състоят от пептиди с мутации и делеции на аминокиселини B.1.1.529 (Omicron) и съответните последователности на Wuhan Hu-1 (таблица S5B). Те съдържат предвидените HLAII свързващи мотиви, както е определено от NetMHCIIpan4.0 ( 34 ) (таблица S9). Пептидите са синтезирани от GL Biochem Shanghai Ltd (Китай). Т-клетъчен анализ чрез IFNy-ELISpot IFNγ-ELISpots бяха проведени, както е описано по-горе ( 20 , 23 , 24). Предварително покрити ELISpot плаки (Mabtech 3420-2APT) се промиват х4 с PBS, блокират се за 1 час (стайна температура) с допълнен RPMI1640 (GibcoBRL) [10% топлинно инактивиран FCS; 1% 100xпеницилин, стрептомицин и L-глутамин разтвори (GibcoBRL)]. 200 000 PBMC бяха засети/ямка и стимулирани 18-22 часа при 37°C с рекомбинантен протеин SARS-CoV-2 [Wuhan Hu-1, B.1.617.2 (Delta) или B.1.1.529 (Omicron) SARS-CoV- 2 S1 spike протеини (10 μg/ml)] или пептидни пулове (10 μg/ml/пептид). Отрицателните и положителните контроли на плаките са средни или анти-CD3 (Mabtech mAb CD3-2). ELISpot плаки бяха разработени с 1 μg/ml биотинилиран античовешки IFNγ детекция Ab, конюгиран с алк-фосфатаза (7-B6-1-ALP, Mabtech), разреден в PBS/0,5% FCS, добавяне на 50 μl/ямка за 2 часа в стая температура, последвана от 50 μl/ямка BCIP/NBT-plus фосфатазен субстрат (Mabtech), 5 минути (стайна температура). Плаките бяха измити и изсушени преди анализа на AID classic ELISpot четец на плаки (Autoimmun Diagnostika GMBH, Германия). Данните от ELISpot бяха анализирани в Microsoft Excel. Средната стойност на две кладенчета само за културална среда се изважда от всички ямки, стимулирани с протеин/пептид, и всеки отговор, който е по-нисък по величина от 2 стандартни отклонения на специфичните за пробата контролни ямки, не се счита за специфичен за стимулиране отговор. Резултатите се изразяват като разлика в (делта) петнообразуващи клетки (SFC)/10 Средната стойност на две кладенчета само за културална среда се изважда от всички ямки, стимулирани с протеин/пептид, и всеки отговор, който е по-нисък по величина от 2 стандартни отклонения на специфичните за пробата контролни ямки, не се счита за специфичен за стимулиране отговор. Резултатите се изразяват като разлика в (делта) петнообразуващи клетки (SFC)/10 Средната стойност на две кладенчета само за културална среда се изважда от всички ямки, стимулирани с протеин/пептид, и всеки отговор, който е по-нисък по величина от 2 стандартни отклонения на специфичните за пробата контролни ямки, не се счита за специфичен за стимулиране отговор. Резултатите се изразяват като разлика в (делта) петнообразуващи клетки (SFC)/106 PBMC между условията на отрицателна контрола и протеин/пептидна стимулация. Резултатите бяха изключени, ако отрицателните контролни ямки показват >100 SFC/10 6 PBMC (n = 4) или клетъчната жизнеспособност е ниска с